ダイレクト RT-qPCR キット II
キットの説明:
◮Foregene が開発した Foreasy Reverse Transcriptase および Foreasy HS Taq DNA Polymerase を使用した Direct RT-qPCR キットと独自の反応バッファーにより、このキットは強力な耐性と適合性を備え、Foregene Lysis システムをテンプレートとして使用して反応を直接テストできます。このキットは、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）核酸検出キットやその他の病原性細菌核酸検出キットの開発に応用できます。
説明
ダイレクト RT-qPCR キットは、個別にパッケージ化された RT-qPCR バッファー、高効率の Foreasy HS Taq DNA ポリメラーゼを提供します。および Foreasy 逆転写酵素 (MMLV)、簡単な検証でバックエンドキットの作成やシステム調整に便利です。
Foregene が開発した Foreasy Reverse Transcriptase および Foreasy HS Taq DNA Polymerase を使用した Direct RT-qPCR キットと独自の反応バッファーにより、このキットは強力な耐性と適合性を備え、Foregene Lysis システムをテンプレートとして使用して反応を直接テストできます。このキットは、新型コロナウイルス感染症（COVID-19）核酸検出キットやその他の病原性細菌核酸検出キットの開発に応用できます。
このキットは、簡単かつ迅速に使用して、IVD 製品のコンポーネントとして直接使用できます。再度開発する必要はなく、簡単な検証のみが必要です。
仕様
500T、50,000T
キットのコンポーネント
| キット内容 (20μL反応系) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500T | 50,000トン | |
| フォーイージーR逆転写酵素 (200U/μL) | 50μL×1 | 1mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA ポリメラーゼ (5U/μL) | 100μL×1 | 1mL×10 |
| 2× ダイレクト RT-qPCRバッファ | 1mL×5 | 500mL×1 |
| 命令 | 1 | 1 |
操作手順
A: テンプレートと試薬の準備
1. 準備済みの RNA テンプレート (RNA テンプレートの抽出と精製には Foregene Total RNA Isolation Kit シリーズのキットを使用することをお勧めします) またはサンプルクラッキング製品 (Foregene Lysis システムの使用をお勧めします)、特定のプライマー (10 μM) およびその他の関連する消耗品、器具を準備します。
2. 2× ダイレクト RT-qPCR バッファー、RNase フリー ddH2O、および 20× ROX 参照色素 (必要な場合) を氷の入ったボックスに入れ、これらを自然に溶かし、穏やかに混合します。
B: RT-qPCR システムの準備
反応系の半分の量の反応バッファーを取得します（たとえば、システムの体積が 20 μL の場合、10 μL の 2× ダイレクト RT-qPCR バッファーを取得する必要があります）). ために相当量の酵素、私たちはそれを提案しますM-MLV：10-30U/20μL反応系,タクDNAポリメラーゼ：1～2U/20μL反応系これは私たちの提案です。テストして調整する必要があります)、RNA テンプレート、特定のプライマーおよびプローブを追加し、RNase-Free ddH を追加します。2０～２０μＬ。RT-qPCR 反応系の具体的な準備は次の表 1 を参照してください。
表 1 : RT-qPCR システムの準備
| 成分 | 音量 | 最終濃度 |
| 2× ダイレクト RT-qPCR バッファー | 10μL | 1× |
| フォーイージー逆転写酵素(MMLV) | 10-30U | |
| Foreasy HS Taq DNA ポリメラーゼ | 1-2U | |
| フォワードプライマー(10μM) | 0.8μL | 50-900nM |
| リバースプライマー(10μM) | 0.8μL | 50-900nM |
| プローブ(4μM) | 1μL | 200nM |
| テンプレート(RNAまたはライセート) | XμL | |
| 20× ROX 参照色素 | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6.4-X)μL | |
| 全容積 | 20μL |
注: Forward Primer および Reverse Primer は、ターゲット遺伝子に特異的なプライマーです。qPCR のシステムは、実際の実験モデルおよび PCR モデルに従って調整できます。ほとんどのプライマーの最終濃度として 400nM を推奨します。調製濃度および推奨最終濃度に応じて、特異的プライマーおよびプローブの量を調整してください。
1*: さまざまな定量的 PCR 機器に応じて、ROX Reference Dye の適切な最終濃度を選択します。一般的な定量 PCR 機器の最適な ROX 参照色素濃度を次の表に示します。
| 定量PCR装置 | ROX 参照色素の最終濃度 |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/ステップワン、等 | 1× (たとえば、20 μL 反応系に 1 μL 20×ROX Reference Dye を追加) |
| ABI 7500、7500 Fast、Stratagene Mx3000P、Mx3005P、Mx4000 など | 0.5× (たとえば、20 μL 反応系に 0.5 μL 20× ROX Reference Dye を追加) |
| Roche PCR装置、Bio-Rad PCR装置、Eppendorf定量PCR装置など | ROX 参照色素なし |
保管と賞味期限
キットは-20 ± 5℃で保管してください。すぐに-20℃の恒温冷蔵庫に保管してください。適切な状態で保管した場合、有効期限は 2 年間です。
