Cell Direct RT qPCR キット - SYBR GREEN I 直接細胞溶解 Cell Ready ワンステップ qRT-PCR キット
説明
このキットは、RT-qPCR 反応用に培養細胞サンプルから RNA を迅速に放出できる独自の溶解バッファー システムを使用しており、時間と労力のかかる RNA 精製プロセスを排除します。RNA テンプレートはわずか 7 分で取得できます。5×ダイレクト RT ミックスと 2×キットに含まれるダイレクト qPCR Mix-SYBR 試薬を使用すると、リアルタイムの定量的 PCR 結果を迅速かつ効果的に得ることができます。
5×ダイレクト RT ミックスと 2×ダイレクト qPCR Mix-SYBR は強力な阻害剤耐性を備えており、サンプルのライセートを RT-qPCR のテンプレートとして直接使用できます。このキットには、独自の RNA 高親和性 Foregene 逆転写酵素、Hot D-Taq DNA ポリメラーゼ、dNTP、MgCl が含まれています。2、反応バッファー、PCR オプティマイザーおよびスタビライザー。
仕様
200×20μl Rxns、1000×20μl Rxns
キットのコンポーネント
| パート I | バッファCL |
| フォアジーン プロテアーゼ プラス II | |
| バッファST | |
| パート II | DNAイレイサー |
| 5× ダイレクト RT ミックス | |
| 2× ダイレクト qPCR ミックス-SYBR | |
| 50× ROX 参照染料 | |
| RNaseフリーのddH2O | |
| 手順 | |
特徴と利点
■シンプルかつ効果的: Cell Direct RT テクノロジーを使用すると、RNA サンプルをわずか 7 分で取得できます。
■ サンプル需要は少なく、10 セル程度でテストできます。
■ ハイスループット: 384、96、24、12、6 ウェルプレートで培養された細胞内の RNA を迅速に検出できます。
■ DNA Eraser は、放出されたゲノムを迅速に削除し、その後の実験結果への影響を大幅に軽減します。
■ 最適化された RT および qPCR システムにより、2 ステップの RT-PCR 逆転写がより効率的になり、PCR の特異性が高まり、RT-qPCR 反応阻害剤に対する耐性が高まります。
キットの適用
適用範囲：培養細胞。
- サンプル溶解によって放出された RNA: このキットの RT-qPCR テンプレートにのみ適用されます。
・本キットは、遺伝子発現解析、siRNAによる遺伝子サイレンシング効果の検証、薬剤スクリーニングなどの目的で使用できます。
ダイアグラム
保管と賞味期限
このキットのパート I は 4℃ で保管してください。パート II は -20℃ で保管してください。
Foregene Protease Plus II は 4 で保管してください。℃、-20℃では凍結しないでください。
試薬2×Direct qPCR Mix-SYBR は -20 で保存する必要があります。℃暗闇で;頻繁に使用する場合は4つに収納することもできます。短期保存の場合は℃（10日以内に使い切る）。
リアルタイム PCR プライマーの設計原則
フォワードプライマーとリバースプライマー
リアルタイム PCR では、プライマーの設計が非常に重要です。プライマーは PCR 増幅の特異性と効率に関係しており、次の原則を参照して設計できます。
プライマーの長さ: 18-30bp。
GC 含有量: 40 ～ 60%。
Tm 値: Primer 5 などのプライマー設計ソフトウェアにより、プライマーの Tm 値が得られます。上流プライマーと下流プライマーの Tm 値は可能な限り近い必要があります。Tm の計算式、Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T) も使用できます。PCR を実行する場合、一般にプライマー Tm 値の 5 °C より低い温度がアニーリング温度として選択されます (対応するアニーリング温度の上昇により、PCR 反応の特異性が高まる可能性があります)。
プライマーと PCR 産物:
設計プライマーPCR増幅産物の長さは100〜150bpであることが好ましい。
テンプレートの二次構造領域にプライマーを設計することは、できる限り避けるべきです。
上流プライマーと下流プライマーの 3' 末端間に 2 つ以上の相補的な塩基が形成されないようにします。
プライマー 3' 末端塩基は、さらに 3 つの連続する G または C がある場合には存在できません。
プライマー自体は相補的な構造を持つことができません。そうしないとヘアピン構造が形成され、PCR 増幅に影響を及ぼします。
ATCG はプライマー配列内でできるだけ均一に分布する必要があり、3' 末端塩基は T として避ける必要があります。
付録 1：Cell Direct RT-qPCR Kit コンポーネント サプリメント パック
1.細胞溶解液
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| キットのコンポーネント (24ウェル溶解システム/ウェル) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| 部私 | バッファCL | 20ml | 100ml |
| フォアジーン プロテアーゼ プラス II | 400μl | 1ml×2 | |
| バッファST | 1ml×2 | 10ml | |
| 部Ⅱ | DNAイレイサー | 400μl | 1ml×2 |
2.RTミックス
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| キットのコンポーネント (20μl反応系) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× ダイレクト RT ミックス | 800μl |
| RNase フリー ddH2O | 1.7ml×2 |
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| キットのコンポーネント (20μl反応系) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× ダイレクト qPCR ミックス-SYBR | 1ml×2 | 1.7ml×6本 |
| 50× ROX 参照染料 | 40μl | 200μl |
| RNase フリー ddH2O | 1.7ml | 10ml |
取扱説明書:
