Cell Total RNA Isolation Kit 細胞からの Total RNA 単離精製キット
キットの説明:
さまざまな培養細胞から高純度で高品質なトータルRNAを11分で取得できます。
RNaseフリー
室温（15～25℃）で動作
DNAクリーニングカラム付き
高いRNA収量
高速: 11 分で抽出が完了
安全性：なし有機化学物質
説明
本キットは、Foregene 社が開発したスピンカラムとフォーミュラを使用し、96、24、12、6 ウェルプレートで培養した細胞から高純度・高品質の total RNA を効率よく抽出することができます。
このキットは、上清と細胞ライセートを簡単に分離し、ゲノム DNA を結合して除去できる効率的な DNA クリーニング カラムを提供します。操作が簡単で時間もかからない.
TRNA 専用カラムは、独自のフォーミュラにより RNA を効率的に結合できます。多数のサンプルを同時に処理できます。
キットのコンポーネント
| キット構成 | RE-03111 | RE-03114 |
| 50T | 200T | |
| バッファー cRL1* | 25mL | 100mL |
| バッファー cRL2 | 15mL | 60mL |
| バッファRW1* | 25mL | 100mL |
| バッファRW2 | 24mL | 96mL |
| RNaseフリーのddH2O | 10mL | 40mL |
| RNA のみのカラム | 50 | 200 |
| DNAクリーニングカラム | 50 | 200 |
| 命令 | 1 | 1 |
*バッファー cRL1 およびバッファー RW1 には刺激性のカオトロピック塩が含まれているため、操作中は手袋を着用し、保護措置を講じてください。
特徴と利点
■ 全プロセスは室温 (15 ～ 25℃) で行われ、氷浴や低温遠心分離は行われません。
■ キット全体は RNase フリーなので、RNA の分解を心配する必要はありません。
■ DNA クリーニング カラムは DNA に特異的に結合するため、キットは DNase を追加せずにゲノム DNA 汚染を除去できます。
■ 高い RNA 収量: RNA 専用カラムと独自のフォーミュラにより、効率的に RNA を精製できます。
■スピードが速い：操作が簡単で11分で完了します。
■ 安全性：有機試薬は必要ありません。
■ 高品質：精製された RNA は高純度であり、タンパク質やその他の不純物が含まれていないため、その後のさまざまな実験に対応できます。
キットの適用
96、24、12、および 6 ウェルプレート内の培養細胞からのトータル RNA の抽出および精製に適しています。
作業の流れ
ダイアグラム
Cell Total RNA Isolation Kit のアガロースゲル電池図は、上記のさまざまな数の細胞を処理し、20 μl の体積で溶出し、2 μl の精製された total RNA を 1% 採取します。
保管と保存期間
キットは室温 (15 ～ 25 ℃) で 12 か月間、2 ～ 8 ℃ でそれより長い期間 (24 か月間) 保存できます。
バッファー cRL1 は、2-ヒドロキシ-1-エタンチオール（オプション）を添加後、4 ℃で 1 か月間保存できます。
RNAが抽出されないか、RNA収量が低い
組織サンプルの RNA 含有量、操作方法、溶出量など、回収効率に影響を与えるさまざまな要因が存在することがよくあります。
1. 操作中に氷浴または極低温 (4 °C) 遠心分離が実行されました。
推奨事項: 全プロセスを通じて室温 (15 ～ 25 °C) で操作し、氷浴や低温での遠心分離は行わないでください。
2. 不適切なサンプル保存または過剰なサンプル保存時間。
推奨事項: サンプルは -80 °C で保存するか、液体窒素で凍結し、凍結融解を繰り返すことは避けてください。RNA 抽出には新鮮な組織または培養細胞を使用してください。
3. サンプルの溶解が不十分です。
推奨事項: 組織を均質化するときは、組織が十分に均質化されていること、および組織細胞が RNA の放出を説明できるほど十分に分割されていることを確認してください。
4. 溶離液が正しく加えられていません。
推奨事項: RNase-Free ddH であることを確認してください。2Oを精製カラム膜の中央に滴下します。
5. 正しい量の無水エタノールがバッファー RL2 またはバッファー RW2 に添加されませんでした。
推奨事項: キットを使用する前に、指示に従い、適切な量の無水エタノールをバッファー RL2 およびバッファー RW2 に加え、よく混合します。
6. 組織サンプルの投与量が適切ではありません。
推奨: 10 ～ 20 mg の組織または (1 ～ 5) × 10 を使用します。6組織を過剰に使用すると RNA 抽出が減少する可能性があるため、バッファー RL1 500 μl あたりの細胞数が増加します。
7. 不適切な溶出量または不完全な溶出。
推奨事項: 精製カラムの溶出量は 50 ～ 200 μl です。溶出効果が満足できない場合は、予熱した RNase-Free ddH を添加した後、室温放置時間を延長することをお勧めします。2O、たとえば 5 ～ 10 分間。
8.精製カラムには、バッファー RW2 洗浄後のエタノール残留物があります。
推奨事項: Buffer RW2 の洗浄後にエタノールが残っている場合は、空のチューブを 1 分間遠心分離し、空のチューブの遠心分離操作の時間を 2 分間に増やすか、精製カラムを室温に 5 分間置いて残留エタノールを適切に除去します。
精製されたRNAは分解される
精製された RNA の品質は、サンプルの保存、RNase の汚染、操作などの要因に関係します。
1. 組織サンプルの保管が間に合わない。
推奨事項: 組織サンプルまたは細胞を採取後に適時に使用しない場合は、直ちに -80 °C または液体窒素で凍結保存してください。RNA を抽出するには、可能な限り新しく採取した組織または細胞サンプルを使用してください。
2. 組織サンプルの凍結融解の繰り返し。
推奨事項: 組織サンプルを保存する場合は、保存用に小さな断片に切断し、サンプルの凍結融解の繰り返しと RNA の分解を避けるために、使用するときに断片の 1 つを取り除くことが最善です。
3. RNase が導入されているか、または手術中に使い捨て手袋、マスクなどを着用していない。
推奨事項: RNA 抽出実験は別々の RNA 操作室で実行し、実験前にテーブルを片付けるのが最善です。
RNase の導入による RNA の分解を最小限に抑えるために、実験中は使い捨ての手袋とマスクを着用してください。
4. 試薬は使用中に RNase によって汚染されます。
推奨事項: 関連する実験には、新しい動物トータル RNA 分離キットと交換してください。
5. RNA操作に使用する遠沈管やチップ等はRNaseで汚染されています。
推奨事項: RNA 抽出に使用する遠沈管、チップ、ピペットなどがすべて RNase フリーであることを確認してください。
精製して得られたRNAは下流の実験に影響を与える
精製カラムで精製された RNA の塩イオン、タンパク質の含有量が多すぎると、逆転写、ノーザンブロットなどの下流の実験に影響を及ぼします。
1. 溶出した RNA には塩イオンが残存しています。
推奨事項: 正しい量のエタノールがバッファー RW2 に添加されていることを確認し、操作に示された遠心速度で精製カラム洗浄を 2 回実行します。塩イオン残留物がある場合は、精製カラムを室温で 5 分間 Buffer RW2 に放置し、遠心分離を行って塩汚染の除去を最大限に高めます。
2. 溶出した RNA 中のエタノール残基。
推奨事項: バッファー RW2 の洗浄後、操作に示された遠心速度で空のチューブの遠心操作を実行することを確認します。エタノール残留物がまだある場合は、空のチューブの遠心操作の時間を 2 分間に増やすか、室温で 5 分間放置します。
