Foreasy Taq DNA ポリメラーゼ
キットの説明:
◮高い特異性: この酵素には特定のホットスタート活性があります。
◮高速増幅: 10 秒/kb。
◮適応性の高いテンプレート: GC の高価値、さまざまな増幅が困難な DNA テンプレートを効率的に増幅するために使用できます。
◮高い忠実度: 通常の Taq 酵素の 6 倍。
◮強力な熱安定性: 37 °C に 1 週間置くことができ、90% 以上の活性を維持します。
説明
Foreasy Taq DNA Polymerase は、遺伝子組換え技術により大腸菌内で発現させた新しい Taq 酵素です。酵素自体には特定のホットスタート活性があり、従来の PCR および qPCR に使用できます。5'→3' DNA ポリメラーゼ活性と 5'→3' エキソヌクレアーゼ活性はありますが、3'→5' エキソヌクレアーゼ活性はありません。
キットのコンポーネント
| 成分 | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA ポリメラーゼ(5U/μL) | 5000U(1mL) | 50KU(10mL) | 500KU(100mL) |
| 2× Taq 反応バッファー | 25mL×5 | 250mL×5本 | 500mL×25本 |
特徴と利点
- 高い特異性: 酵素には特定のホットスタート活性があります。
- 高速増幅: 10 秒/kb。
- 適応性の高いテンプレート: GC 価値の高い、さまざまな増幅が困難な DNA テンプレートを効率的に増幅するために使用できます。
- 高い忠実度: 通常の Taq 酵素の 6 倍。
- 強い熱安定性: 37 °C に 1 週間放置しても、90% 以上の活性を維持します。
キットの適用
各種PCR/qPCR装置およびダイレクトPCR装置
DNA断片のPCR増幅
DNA標識
DNA配列決定
PCR Aテール
Uの定義
1U: 活性化サケ精子 DNA を鋳型/プライマーとして使用し、74℃で 30 分間、10 nmol のデオキシヌクレオチドを酸不溶性物質に組み込むのに必要な酵素の量。
反応条件
| 温度 | 時間 | サイクル |
| 37℃ | 5分 | 1 |
| 94℃ | 5分 | 1 |
| 94℃ | 10秒 | 35 |
| 60℃ | 10秒 | |
| 72℃ | 20秒/kb | |
| 72℃ | 2分 | 1 |
保管所
-20 ± 5 °C で 2 年間、または -80 °C で長期保管。
増幅信号なし
1.キット内の Taq DNA ポリメラーゼは、不適切な保管またはキットの使用期限切れにより活性を失います。
推奨事項: キットの保管条件を確認してください。適切な量の Taq DNA ポリメラーゼを PCR システムに再追加するか、関連実験用に新しいリアルタイム PCR キットを購入してください。
2.DNA 鋳型には Taq DNA ポリメラーゼの阻害剤が多く含まれています。
提案: テンプレートを再精製するか、使用するテンプレートの量を減らしてください。
3.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.テンプレートの量が少なすぎる、または多すぎる。
推奨事項: テンプレートの直線化勾配希釈を実行し、リアルタイム PCR 実験に最適な PCR 効果を持つテンプレート濃度を選択します。
NTC の蛍光値が高すぎます
1.操作中に発生する試薬の汚染。
推奨事項: リアルタイム PCR 実験では新しい試薬と交換してください。
2.PCR反応系の準備中にコンタミネーションが発生した。
推奨事項: 操作中は、ラテックス手袋の着用、フィルター付きピペットチップの使用など、必要な保護措置を講じてください。
3.プライマーが分解されており、プライマーの分解により非特異的な増幅が発生します。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
プライマーダイマーまたは非特異的増幅
1.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR EasyTM Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
2.PCR アニーリング温度が低すぎます。
提案: PCR アニーリング温度を毎回 1℃ または 2℃ 上げます。
3.PCR産物が長すぎます。
推奨事項: リアルタイム PCR 産物の長さは 100 ～ 150 bp の間であり、500 bp 以下である必要があります。
4.プライマーが分解され、プライマーの分解により特異的な増幅が現れます。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
定量値の再現性が低い
1.機器が故障している。
提案: 装置の各 PCR ホール間に誤差が存在する可能性があり、その結果、温度管理または検出時の再現性が低下します。対応する機器の説明書に従ってご確認ください。
2.サンプルの純度が良くありません。
推奨事項: サンプルが不純であると、テンプレートとプライマーの純度を含む実験の再現性が低下します。テンプレートを再精製するのが最善であり、プライマーは SDS-PAGE で精製するのが最適です。
3.PCR システムの準備と保管時間が長すぎます。
推奨: リアルタイム PCR システムは、準備後すぐに PCR 実験に使用し、長時間放置しないでください。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
