Foreasy HS Taq DNA ポリメラーゼ
キットの説明:
◮高特異性：ホットスタート活性の高い酵素です。
◮高速増幅: 10 秒/kb。
◮高いテンプレート適応性: 高いテンプレートを効率的に増幅するために使用できます。GC価値とさまざまな増幅が難しい DNA テンプレート。
◮高い忠実度: 忠実度は 6 倍of 普通のTaq酵素。
説明
Foreasy HS Taq DNA Polymerase は、遺伝子組換え技術により大腸菌内で発現させた新しい Taq 酵素です。酵素を特殊な処理をした後、'活性は熱活性化の前に阻害されるため、低温条件下でのプライマーまたはプライマーダイマーの非特異的アニーリングによって引き起こされる非特異的増幅が阻害されます。この製品は特異性の高い PCR React に適していますイオン、複数の PCR 、高い GC 含有量 (> 60%)、と二次構造またはその他の強力なバックグラウンドゲノムic増幅と大規模ゲノムic増幅検出。この酵素は 5' → 3' DNA ポリメラーゼ活性と 5' → 3' エキソヌクレアーゼ活性を持ちますが、3' → 5' エキソヌクレアーゼ活性は持ちません。
キットのコンポーネント
| 成分 | IM-01021 | IM-01022 | IM-01023 |
| Foreasy HS Taq DNA ポリメラーゼ (5 U/μL) | 5000U(1mL) | 50KU(10mL) | 500KU(100mL) |
| 2× Taq 反応バッファー | 25mL×5 | 250mL×5本 | 500mL×25本 |
特徴と利点
・高い特異性：ホットスタート活性の高い酵素です。
- 高速増幅: 10 秒/kb。
- 高いテンプレート適応性: 高いテンプレートを効率的に増幅するために使用できます。GC価値とさまざまな増幅が難しい DNA テンプレート。
- 高い忠実度: 忠実度は 6 倍ですof 普通のTaq酵素。
キットの適用
- 各種PCR/qPCRシステムおよびダイレクトPCRシステム
- PCR増幅されたDNA断片
- DNAマーク
- DNA配列決定
- PCR プラス A テール
アクティビティの定義
1U : 10 nmolの酵素を取り込むのに必要な酵素の量DNA活性化サケ精子 DNA をテンプレート/プライマーとして使用し、74 °C、30 分間、酸不溶性物質に溶解します。
反応条件
| 温度 | 反応時間 | サイクルタイム |
| 37℃ | 5分 | 1 |
| 94℃ | 5分 | 1 |
| 94℃ | 10秒 | 40 |
| 60℃ | 10秒 |
ノート：10 µL および 20 µL システムの場合、サーマル サイクラーに加熱蓋がない場合は、同量のミネラル オイルを追加します。
PCRの反応条件は、鋳型やプライマー等の構造条件により異なる。具体的な操作においては、鋳型の種類、対象断片のサイズ、増幅断片の塩基配列、プライマーのGC含量や長さなどの具体的な条件に応じて、アニーリング温度や伸長時間などの最適な反応条件を設計する必要があります。
保管所
-20 ± 5 °C で 2 年間、または -80 °C で長期保管。
増幅信号なし
1.キット内の Taq DNA ポリメラーゼは、不適切な保管またはキットの使用期限切れにより活性を失います。
推奨事項: キットの保管条件を確認してください。適切な量の Taq DNA ポリメラーゼを PCR システムに再追加するか、関連実験用に新しいリアルタイム PCR キットを購入してください。
2.DNA 鋳型には Taq DNA ポリメラーゼの阻害剤が多く含まれています。
提案: テンプレートを再精製するか、使用するテンプレートの量を減らしてください。
3.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.テンプレートの量が少なすぎる、または多すぎる。
推奨事項: テンプレートの直線化勾配希釈を実行し、リアルタイム PCR 実験に最適な PCR 効果を持つテンプレート濃度を選択します。
NTC の蛍光値が高すぎます
1.操作中に発生する試薬の汚染。
推奨事項: リアルタイム PCR 実験では新しい試薬と交換してください。
2.PCR反応系の準備中にコンタミネーションが発生した。
推奨事項: 操作中は、ラテックス手袋の着用、フィルター付きピペットチップの使用など、必要な保護措置を講じてください。
3.プライマーが分解されており、プライマーの分解により非特異的な増幅が発生します。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
プライマーダイマーまたは非特異的増幅
1.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR EasyTM Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
2.PCR アニーリング温度が低すぎます。
提案: PCR アニーリング温度を毎回 1℃ または 2℃ 上げます。
3.PCR産物が長すぎます。
推奨事項: リアルタイム PCR 産物の長さは 100 ～ 150 bp の間であり、500 bp 以下である必要があります。
4.プライマーが分解され、プライマーの分解により特異的な増幅が現れます。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
定量値の再現性が低い
1.機器が故障している。
提案: 装置の各 PCR ホール間に誤差が存在する可能性があり、その結果、温度管理または検出時の再現性が低下します。対応する機器の説明書に従ってご確認ください。
2.サンプルの純度が良くありません。
推奨事項: サンプルが不純であると、テンプレートとプライマーの純度を含む実験の再現性が低下します。テンプレートを再精製するのが最善であり、プライマーは SDS-PAGE で精製するのが最適です。
3.PCR システムの準備と保管時間が長すぎます。
推奨: リアルタイム PCR システムは、準備後すぐに PCR 実験に使用し、長時間放置しないでください。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
