(96 ウェル) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR キット – Taqman
説明
の(96 ウェル) クイックイージーTM セルダイレクト RT-qPCR キット–タクマン提供しますユニークな溶解バッファーシステムto RNAを素早く放出する培養細胞からRT-qPCR 反応用のサンプルを作成し、時間と労力のかかる作業を排除します。RNA 精製プロセス。必要な RNA テンプレートを取得するのにわずか 7 分しかかかりません。の5× ダイレクト RT ミックスと2× ダイレクト qPCR ミックス-SYBR箱に入った状態で提供されるので、すぐに使用できます。リアルタイムの定量的な情報を効果的に取得するPCRの結果。
5x Direct RT Mix および 2x Direct qPCR Mix-Taqman は強力な阻害剤耐性を備えており、効率的な逆転写と特異的増幅のためのテンプレートとしてテスト対象のサンプルのライセートを使用できます。この試薬には、RNA に対して高い親和性を持つ Foregene 独自の逆転写酵素のほか、Hot D-Taq DNA ポリメラーゼ、dNTP、MgCl が含まれています。2 、反応バッファー、PCR オプティマイザーおよびスタビライザーを備えており、溶解バッファーと組み合わせて使用すると、サンプルを迅速、簡単、正確に検出でき、高感度、強力な特異性、良好な安定性という特徴があります。
このキットは、96 ウェル培養細胞のマイクロシステム溶解を目的としており、優れた均一性と一貫性を備えています。キットのコンポーネントは、96 回の溶解反応、96 回の逆転写反応、および 96×2 qPCR 反応を提供し、1 回限りの使用で 96 ウェル細胞プレートを満たし、試薬の繰り返しの開封、凍結、解凍による汚染や試薬の性能の低下を回避します。
キットのコンポーネント
| キット構成 ( 50 μL溶解システム/20μLRT 反応系/20μL qPCR反応系) | DRT-03021 | 述べる | |
| 96T | |||
| 部I | バッファCL | 5mL | 細胞溶解 |
| フォアジーンプロテアーゼプラスII | 100 μL | ||
| バッファST | 500 μL | ||
| 部 II | DNA消しゴム | 100 μL | |
| 5× ダイレクト RT ミックス | 400 μL | RT | |
| 2× ダイレクト qPCR ミックス-タクマン | 1mL ×2 | qPCR | |
| 50× ROX 参照染料 | 400μL | ||
| RNase- 無料ああ2 O | 1.7mL |
| |
| M毎年恒例 | 1 ピース | 1食分 | |
*: 溶解試薬 DNA Eraser はキットのパート II に含まれています。Cell Lysis、RT、および qPCR コンポーネントは個別に購入できます。
特徴と利点
■シンプルかつ効果的: Cell Direct RT テクノロジーを使用すると、RNA サンプルをわずか 7 分で取得できます。
■ サンプル需要は少なく、10 セル程度でテストできます。
■ ハイスループット: 384、96、24、12、6 ウェルプレートで培養された細胞内の RNA を迅速に検出できます。
■ DNA Eraser は、放出されたゲノムを迅速に削除し、その後の実験結果への影響を大幅に軽減します。
■ 最適化された RT および qPCR システムにより、2 ステップの RT-PCR 逆転写がより効率的になり、PCR の特異性が高まり、RT-qPCR 反応阻害剤に対する耐性が高まります。
キットの適用
適用範囲：培養細胞。
- サンプル溶解によって放出された RNA: このキットの RT-qPCR テンプレートにのみ適用されます。
・本キットは、遺伝子発現解析、siRNAによる遺伝子サイレンシング効果の検証、薬剤スクリーニングなどの目的で使用できます。
保管と賞味期限
このキットのパート I は 4 に保管してください。℃;パート II は -20℃ で保管してください。
Foregene Protease Plus II は 4 で保管してください。℃、-20℃では凍結しないでください。
試薬2×Direct qPCR Mix-Taqman は -20 で保存する必要があります。℃暗闇で;頻繁に使用する場合は4つに収納することもできます。短期保存の場合は℃（10日以内に使い切る）。
リアルタイム PCR プライマーの設計原則
フォワードプライマーとリバースプライマー
リアルタイム PCR では、プライマーの設計が非常に重要です。プライマーは PCR 増幅の特異性と効率に関係しており、次の原則を参照して設計できます。
- プライマーの長さ: 18-30bp。
- GC 含有量: 40 ～ 60%。
- Tm 値: Primer 5 などのプライマー設計ソフトウェアにより、プライマーの Tm 値が得られます。上流プライマーと下流プライマーの Tm 値は可能な限り近い必要があります。Tm の計算式、Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T) も使用できます。PCR を実行する場合、一般にプライマー Tm 値の 5 °C より低い温度がアニーリング温度として選択されます (対応するアニーリング温度の上昇により、PCR 反応の特異性が高まる可能性があります)。
- プライマーと PCR 産物:
- 設計プライマーPCR増幅産物の長さは100〜150bpであることが好ましい。
- テンプレートの二次構造領域にプライマーを設計することは、できる限り避けるべきです。
- 上流プライマーと下流プライマーの 3' 末端間に 2 つ以上の相補的な塩基が形成されないようにします。
- プライマー 3' 末端塩基は、さらに 3 つの連続する G または C がある場合には存在できません。
- プライマー自体は相補的な構造を持つことができません。そうしないとヘアピン構造が形成され、PCR 増幅に影響を及ぼします。
- ATCG はプライマー配列内でできるだけ均一に分布する必要があり、3' 末端塩基は T として避ける必要があります。
付録1：CエルダイレクトRT-qPCR キットの構成品tサプリメントパック
1.細胞溶解液
| 細胞溶解液 | |||
| キットのコンポーネント (24ウェル溶解システム/ウェル) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500T | ||
| 部私 | バッファCL | 20ml | 100ml |
| フォアジーン プロテアーゼ プラス II | 400μl | 1ml×2 | |
| バッファST | 1ml×2 | 10ml | |
| 部Ⅱ | DNAイレイサー | 400μl | 1ml×2 |
| RTミックス | |
| キットのコンポーネント (20μl反応系) | DRT-01011-B1 |
| 200T | |
| 5× ダイレクト RT ミックス | 800μl |
| RNase フリー ddH2O | 1.7ml×2 |
| qPCRミックス | ||
| キットのコンポーネント (20μl反応系) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200T | 1000T | |
| 2× ダイレクト qPCR ミックス - Taqman | 1ml×2 | 1.7ml×6本 |
| 20× ROX 参照色素 | 40μl | 200μl |
| RNase フリー ddH2O | 1.7ml | 10ml |
取扱説明書:
