リアルタイム PCR Easyᵀᴹ-Taqman
キットの説明:
◮シンプル—2× PCR ミックスにより実験エラーと操作時間を削減します。
◮特異的 - 最適化されたバッファーとホットスタート Taq 酵素により、非特異的増幅とプライマーダイマー形成を防止できます。
◮高感度 - テンプレートの低コピーを検出可能
◮優れた汎用性 - ほとんどのリアルタイム定量 PCR 機器と互換性があります
キットの説明
2X リアル PCR が簡単TMReal Time PCR Easy によって提供される Mix-TaqmanTM-Taqman キットは、リアルタイム PCR 増幅反応に特定の蛍光プローブを使用する新しいプレミックス システムであり、製品の特異性と反応感度を大幅に向上させることができます。ROX は内部対照色素として提供されます。
2X リアル PCR 簡単TMMix-Taqman には、Foregene 独自のホットスタート Taq DNA ポリメラーゼが含まれています。通常のTaq酵素と比較して、増幅効率が高く、特異的増幅能力が高く、ミスマッチ率が低いという利点があります。非特異的増幅を軽減し、PCR の精度を向上させることができます。
仕様
| リアルタイム PCR 簡単TM-タクマン | ||||
| キット構成（20μl系） | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
| 200T | 500T | 1000T | 2000T | |
| 2×リアルPCR簡単TMミックス-タクマン | 1ml×2 | 1.7 ml×3 | 1.7 ml×6 | 1.7 ml×12 |
| 20×ROX 参照色素 | 200μl | 0.5ml | 1ml | 1ml×2 |
| DNase フリー ddH2O | 1.7ml | 1.7 ml×2 | 10ml | 20ml |
| I指示 | 1 | 1 | 1 | 1 |
特徴と利点
■ シンプル—2X PCR ミックスにより実験エラーと操作時間を削減します。
■ 特異的 - 最適化されたバッファーとホットスタート Taq 酵素により、非特異的増幅とプライマーダイマー形成を防止できます。
■ 高感度 - テンプレートの低コピーを検出できます。
■ 優れた汎用性 - ほとんどのリアルタイム定量 PCR 装置と互換性があります。
キットの適用
qPCR分析
作業の流れ
グラフィック
保管と保存期間
このキットは光を避け、-20℃で保管してください。頻繁に使用する場合は、4℃で短期間（10日間）保存することもできます。
増幅信号なし
1.キット内の Taq DNA ポリメラーゼは、不適切な保管またはキットの使用期限切れにより活性を失います。
推奨事項: キットの保管条件を確認してください。適切な量の Taq DNA ポリメラーゼを PCR システムに再追加するか、関連実験用に新しいリアルタイム PCR キットを購入してください。
2.DNA 鋳型には Taq DNA ポリメラーゼの阻害剤が多く含まれています。
提案: テンプレートを再精製するか、使用するテンプレートの量を減らしてください。
3.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.テンプレートの量が少なすぎる、または多すぎる。
推奨事項: テンプレートの直線化勾配希釈を実行し、リアルタイム PCR 実験に最適な PCR 効果を持つテンプレート濃度を選択します。
NTC の蛍光値が高すぎます
1.操作中に発生する試薬の汚染。
推奨事項: リアルタイム PCR 実験では新しい試薬と交換してください。
2.PCR反応系の準備中にコンタミネーションが発生した。
推奨事項: 操作中は、ラテックス手袋の着用、フィルター付きピペットチップの使用など、必要な保護措置を講じてください。
3.プライマーが分解されており、プライマーの分解により非特異的な増幅が発生します。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
プライマーダイマーまたは非特異的増幅
1.Mg2+濃度が適切ではありません。
推奨事項: 当社が提供する 2× Real PCR EasyTM Mix の Mg2+ 濃度は 3.5 mM です。ただし、一部の特殊なプライマーおよびテンプレートでは、Mg2+ 濃度が高くなる場合があります。したがって、MgCl2 を直接添加して Mg2+ 濃度を最適化できます。最適化のために毎回 Mg2+ を 0.5mM ずつ増やすことをお勧めします。
2.PCR アニーリング温度が低すぎます。
提案: PCR アニーリング温度を毎回 1℃ または 2℃ 上げます。
3.PCR産物が長すぎます。
推奨事項: リアルタイム PCR 産物の長さは 100 ～ 150 bp の間であり、500 bp 以下である必要があります。
4.プライマーが分解され、プライマーの分解により特異的な増幅が現れます。
提案: SDS-PAGE 電気泳動を使用してプライマーが分解されているかどうかを検出し、リアルタイム PCR 実験用に新しいプライマーに置き換えます。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
定量値の再現性が低い
1.機器が故障している。
提案: 装置の各 PCR ホール間に誤差が存在する可能性があり、その結果、温度管理または検出時の再現性が低下します。対応する機器の説明書に従ってご確認ください。
2.サンプルの純度が良くありません。
推奨事項: サンプルが不純であると、テンプレートとプライマーの純度を含む実験の再現性が低下します。テンプレートを再精製するのが最善であり、プライマーは SDS-PAGE で精製するのが最適です。
3.PCR システムの準備と保管時間が長すぎます。
推奨: リアルタイム PCR システムは、準備後すぐに PCR 実験に使用し、長時間放置しないでください。
4.PCR増幅条件が適切でない、またはプライマー配列または濃度が不適切である。
提案: プライマー配列が正確であること、およびプライマーが分解されていないことを確認してください。増幅シグナルが良好でない場合は、アニーリング温度を下げ、プライマー濃度を適切に調整してみてください。
5.PCR システムが不適切、またはシステムが小さすぎます。
提案: PCR 反応系が小さすぎると検出精度が低下します。リアルタイム PCR 実験を再実行するには、定量 PCR 装置が推奨する反応システムを使用するのが最善です。
