大腸菌O157:H7核酸検出キット(PCR蛍光プローブ法/凍結乾燥)
キットの説明:
カタログ番号FP103
食品、飼料、水サンプル、環境サンプル中の大腸菌 O157:H7 の迅速な検出とスクリーニングに使用されます。
説明
のために使用されます食品、飼料、水サンプルおよび環境サンプル中の大腸菌 O157:H7 の迅速な検出とスクリーニング。
【試験原理】
蛍光 PCR 技術の原理に従って、大腸菌 O157: H7 の特定の遺伝子用に特定のプライマーと Taqman プローブを設計し、蛍光 PCR 装置によって検出して、大腸菌 O157: H7 の DNA の定性検出を実現します。
キット内容
注: ROX チャネルプローブは含まれていません。
| Cコンポーネント | 仕様 | Q量 |
| バッファA | チューブ | 1 |
| バッファーB | チューブ | 1 |
| ポジティブコントロール | チューブ | 1 |
| ネガティブコントロール | チューブ | 1 |
予想される用途
のために使用されます 食品、飼料、水サンプルおよび環境サンプル中の大腸菌 O157:H7 の迅速な検出とスクリーニング。
保管条件と使用期限
凍結融解の繰り返しを避け、-20℃の暗所で保管してください。
有効期限は12年です製造年月日は外箱に記載されております。
器具と消耗品
蛍光定量 PCR 装置、ピペット ガンおよび対応するチップ、ボルテックス シェーカー、小型遠心分離機。
使用法
1. サンプル処理
1.1 サンプルの種類: このキットは、食品、飼料、水のサンプル、および大腸菌 O157:H7 による汚染が疑われるその他のサンプルに適しています。深く加工された肉製品、飲料、および色素を含むその他の物質の場合、蛍光シグナル収集への影響を避けるために、すすぐ必要があります。
1.2 サンプル処理: 大腸菌 O157:H7 のサンプル調製、濃縮培養、分離については、「GB 4789.10-2016 食品安全国家標準食品微生物検査の大腸菌 O157:H7 検査」を参照してください。
- N核酸抽出
20 mL の濃縮溶液を 1.5 mL 遠心管に取り、200 μL の微生物ライセートを加え（追加のキットが必要です）、30 秒間ボルテックスし、軽く遠心分離し、脇に置きます。
備考: ライセートからの核酸の抽出は 10 分以内に完了する必要があり、長期間保存することはできません。
3. 核酸増幅
3.1 使用する蛍光定量 PCR 装置の電源を入れます。
キットのバッファー A とバッファー B を完全に溶かし、短時間遠心分離します。18 μL のバッファー A と 2 μL のバッファー B を各 PCR 反応チューブに加えます。次に、ネガティブコントロール、抽出した核酸、ポジティブコントロールをそれぞれ 5 mL ずつ PCR 反応チューブに加え、チューブに蓋をし、軽く遠心分離します。
3.3 PCR 反応チューブを蛍光 PCR 装置に移し、次の手順で増幅実験を行います。反応系として 25 mL を選択し、各サイクルで 60°C で蛍光シグナルを収集し、検出チャンネルとして FAM を選択します。
| ステップ | プログラム | サイクル数 |
| 1 | 37℃ 5分 | 1 |
| 2 | 9 5℃ 3分 | 1 |
| 3 | 95℃ 15秒 | 4 0 |
| 60℃ 30秒（蛍光収集） |
問題分析のガイド
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNAが抽出できない、または核酸の収量が低い
通常、回収効率に影響を与える要因は数多くあります。たとえば、サンプル RNA の含有量、操作方法、溶出量などです。
一般的な原因の分析：
1.操作中の氷浴または低温（4℃）遠心分離。
推奨: 室温 (15 ～ 25 °C) で操作し、氷浴や低温遠心機は絶対に使用しないでください。
2. サンプルの不適切な保管または長期間にわたるサンプルの保管。
提案: サンプルは -80 °C で保存するか、液体窒素で凍結し、凍結融解を繰り返すことは避けてください。RNA 抽出には新たに収集したサンプルを使用してください。
3.サンプルの溶解が不十分である
推奨事項: サンプルと作業溶液 (直鎖アクリルアミド) が完全に混合され、室温 (15 ～ 25 °C) で 10 分間インキュベートされていることを確認してください。
4.溶離液の添加が間違っている
推奨事項: RNase-Free ddH2O が精製カラムの膜の中央に添加されていることを確認してください。
5. バッファー viRW2 内の無水エタノールの量が不適切
提案: キットを使用する前に、指示に従い、適切な量の無水エタノールをバッファー viRW2 に加え、よく混合してください。
6.サンプルの不適切な使用。
推奨: 500μl のバッファー viRL あたり 200μl のサンプル。サンプル量が多すぎると、RNA 抽出率が低下します。
7.溶出量が不適切または溶出が不完全です。
提案: 精製カラムの溶離液量は 30 ～ 50 μl です。溶出効果が満足できない場合は、予熱した RNase-Free ddH を追加することをお勧めします。2O 室温に置く時間を 5 ～ 10 分間延長します。
8.精製カラムには、バッファー viRW2 で洗浄した後、エタノールが残留します。
提案: バッファー viRW2 で洗浄し、空のチューブを 2 分間遠心分離した後もエタノールがまだ残っている場合は、空のチューブの遠心分離後、精製カラムを室温で 5 分間放置して、残っているエタノールを完全に除去できます。
精製されたRNA分子の分解
精製された RNA の品質は、サンプルの保管、RNase の汚染、操作などの要因に関係します。
一般的な原因の分析：
1.採取したサンプルの保存が間に合わなかった。
推奨: サンプルを採取後、期限内に使用しない場合は、直ちに -80 ℃ または液体窒素で保管してください。RNA 分子の抽出には、可能な限り新しく採取したサンプルを使用するようにしてください。
2.採取したサンプルが凍結と融解を繰り返していた。
提案: サンプルの収集および保存中に凍結と解凍を繰り返さないようにしてください (1 回まで)。 そうしないと、核酸の収量が減少します。
3.手術室にRNaseが導入されているか、使い捨ての手袋やマスク等が着用されていない。
提案: RNA 分子の抽出実験は別の RNA 手術室で行うのが最善であり、実験テーブルは実験前に清掃されます。RNase 導入による RNA の分解を避けるために、実験中は使い捨ての手袋とマスクを着用してください。
4.試薬は使用中にRNaseにより汚染されます。
提案: 関連する実験には、新しいウイルス RNA 分離キットと交換してください。
5. 遠心管、ピペットチップなどの RNase 汚染。 提案: 遠心管、ピペットチップ、ピペットがすべて RNase フリーであることを確認してください。
精製された RNA 分子は下流の実験に影響を与えた
精製カラムで精製された RNA 分子は、塩イオンやタンパク質が多すぎると、逆転写やノーザンブロットなどの下流の実験に影響を及ぼします。
1.溶出されたRNA分子中に塩イオンが残留している。
推奨事項: 適切な量の無水エタノールがバッファー viRW2 に加えられていることを確認し、取扱説明書に記載されている正しい遠心分離速度に従って精製カラムを 2 回洗浄します。塩イオンがまだ残っている場合は、バッファー viRW2 を精製カラムに追加し、室温で 5 分間放置します。その後、遠心分離を行って塩イオン汚染を最大限に除去します。
2.溶出したRNA分子中にエタノールが残っている
提案: 精製カラムが Buffer viRW2 で洗浄されたことを確認したら、取扱説明書に記載されている遠心速度に従って空のチューブ遠心分離を実行してください。エタノールがまだ残っている場合は、空のチューブを遠心分離した後、室温で 5 分間放置して、残っているエタノールを最大限に除去します。
取扱説明書:
