口腔スワブ/FTA カード DNA 分離キット 口腔スワブからのゲノム DNA 抽出または精製キット
キットの説明:
口腔綿棒/FTA カードサンプルから高品質のゲノム DNA を迅速に精製します。
◮RNase コンタミネーションなし:キットに含まれる DNA 専用カラムを使用すると、実験中に RNase を添加せずにゲノム DNA から RNA を除去できるため、外因性 RNase による実験室の汚染を防ぐことができます。
◮速いスピード：Foregene プロテアーゼは、類似のプロテアーゼよりも活性が高く、組織サンプルを迅速に消化します。操作は簡単で、ゲノムDNA抽出操作は20～80分以内に完了します。
◮便利：遠心分離は室温で行われ、4℃の低温遠心分離やDNAのエタノール沈殿は必要ありません。
◮安全性：有機試薬の抽出は必要ありません。
◮高品質：抽出されたゲノム DNA には大きな断片が含まれており、RNA や RNase が含まれておらず、イオン含有量が極めて低いため、さまざまな実験の要件を満たすことができます。
◮微量溶出システム:ゲノム DNA の濃度を高めることができるため、下流の検出や実験に便利です。
説明
このキットは、口腔綿棒および FTA カード (血液スポット) から高濃度のゲノム DNA を取得するための効率的かつ迅速な方法を提供します。当社を利用して'独自の DNA 専用シリカ膜スピンカラムと Foregene Protease を組み合わせたフォーミュラにより、80 分で高濃度、高品質のゲノム DNA を抽出できます。特別に設計された小型精製カラムがゲノム DNA を結合し、少量で DNA を溶出できます (15μl) の溶出システムにより、得られたゲノム DNA の濃度を高めることができ、下流の検出や実験に便利です。このキットは一度に 1 つ以上のサンプルを処理でき、精製プロセスではフェノール、クロロホルムなどの有機物質の抽出や、時間のかかるイソプロパノールやエタノール沈殿が不要で、操作が簡単で時間を節約できます。
仕様
50 準備
キットのコンポーネント
| バッファST1 |
| バッファST2 |
| 直鎖状アクリルアミド |
| バッファPW |
| バッファーWB |
| バッファEB |
| フォアジーンプロテアーゼ |
| DNA のみのカラム |
| 手順 |
特徴と利点
- RNase コンタミネーションなし: キットに付属の DNA 専用カラムを使用すると、実験中に RNase を添加せずにゲノム DNA から RNA を除去できるため、実験室が外因性 RNase によって汚染されることがなくなります。
-高速速度: Foregene プロテアーゼは類似のプロテアーゼよりも活性が高く、サンプルを迅速に消化します。簡単な操作。
・便利：遠心分離は室温で行われ、4℃の低温遠心分離やDNAのエタノール沈殿は必要ありません。
-安全性: 有機試薬抽出は必要ありません。
-高品質: 抽出されたゲノム DNA は大きな断片を持ち、RNA や RNase を含まず、イオン含有量が非常に低いため、さまざまな実験の要件を満たすことができます。
- 微量溶出システム: ゲノム DNA の濃度を高めることができ、下流の検出や実験に便利です。
キットの適用
次のサンプルからのゲノム DNA の精製に適しています: 口腔スワブ、FTA カード (血液汚れ)。
保管と賞味期限
-このキットは、室温 (15 ～ 25 °C) の乾燥条件下で 12 か月間保存できます。長期間保存する必要がある場合は、2 ～ 8°C で保存できます。
注: 低温で保管すると、溶液が沈殿しやすくなります。使用前に、必ずキット内の溶液を一定期間室温に置いてください。必要に応じて、37℃の水浴で10分間予熱して沈殿を溶解し、使用前に混合してください。
-Foregene プロテアーゼ ソリューションは、室温で長期間 (3 か月間) 保存すると活性を発揮する独自の配合になっています。活性と安定性は 4°C で保管するとより良くなるため、-20°C で保管しないでください。4°C で保管することをお勧めします。
精製カラムが詰まっている
このキットでは、ゲノム DNA 抽出操作において、遠心分離ステップを行わずに精製カラムをサンプルの酵素溶解混合物に直接吸着させますが、不完全な酵素化やサンプルの高粘度により精製カラムがブロックされる可能性があります。
考えられる原因は次のとおりです。
1. 組織サンプルの不完全な酵素消化。
推奨事項: Foregene Protease のサンプル処理時間を適切に延長するか、12,000 rpm (約 13,400 × g) で 5 分間遠心分離した後に上清を採取することができます。
2. 組織サンプルまたは大きな組織の過剰な使用。
推奨事項: サンプル内の口腔スワブの数は 1 つを超えないようにすることが最善です。サンプルが大きすぎる場合は、それに応じてバッファー ST1、Foregene Protease、バッファー ST2 の投与量を増やしてください。
3. サンプルの粘度が高すぎます。
推奨事項: ゲノム DNA 抽出前に、サンプルを 10 mM Tris-HCl で適切に希釈できます。
4. 血液カードの破片が吸引されています。
推奨事項: ブラッドスポット (FTA カード) ゲノム抽出のステップ 6 の一時遠心時間は、適切に延長できます。
収量が低い、または DNA がない
多くの場合、ゲノム DNA の収量に影響を与えるさまざまな要因 (サンプルの起源、サンプルの保存条件、サンプルの調製、操作など) が存在します。
抽出中にゲノム DNA を取得できない
考えられる原因は次のとおりです。
1. サンプルの不適切な保存や長期間の保管は、ゲノム DNA の分解につながります。
推奨事項: 口腔綿棒はできれば新たに採取する必要があり、保存した綿棒をゲノム DNA 抽出操作に使用することはお勧めできません。血痕サンプルは品質が保証されていることを確認し、保管期間が長すぎないようにする必要があります。
2. 組織の使用量が少なすぎると、対応するゲノム DNA が抽出されない可能性があります。
推奨事項: 操作ガイドの口腔スワブのサンプリング手順に従い、ゲノム DNA 抽出に十分な細胞が口腔スワブに付着できるように、できるだけ何度も拭き取ってください。血痕サンプルの抽出では、血痕の切断領域を適切に増やすことができます。
3. Foregene Protease が不適切に保存されると、その活性が低下または不活化されます。
推奨事項: Foregene Protease の保管条件を確認するか、酵素反応用の新しい Foregene Protease と交換してください。
4. キットの保存が不適切であったり、保管時間が長すぎたりすると、キット内の一部のコンポーネントが故障することがあります。
推奨事項: 関連する手順のために、新しい口腔スワブ DNA 分離キットを購入してください。
5. Buffer WB には無水エタノールは添加されません。
推奨事項: バッファー WB に正しい量の無水エタノールが加えられていることを確認してください。
6. 溶離液がシリコン膜に正しく添加されていません。
推奨事項: 溶出効率を高めるために、65 °C に予熱した溶離液をシリコン膜の中央に滴下し、室温で 5 分間放置します。
低収量のゲノム DNA を分離
考えられる原因は次のとおりです。
1. サンプルの不適切な保存や長期間の保管は、ゲノム DNA の分解につながります。
推奨事項: 口腔スワブは新たに採取することが好ましく、保存されたスワブはゲノム DNA 抽出には使用しないでください。
2. 組織サンプルの量が少なすぎると、抽出されるゲノム DNA の量が少なくなります。
推奨事項: 操作ガイドの口腔スワブのサンプリング手順に従い、ゲノム DNA 抽出に十分な細胞が口腔スワブに付着できるように、できるだけ何度も拭き取ってください。
3. Foregene Protease が不適切に保存されると、その活性が低下または不活化されます。
推奨事項: Foregene Protease の保管条件を確認するか、酵素反応用の新しい Foregene Protease と交換してください。
4. 溶離液の問題。
推奨事項: 溶出にはバッファー EB を使用してください。ddHを使用する場合2O またはその他の溶離液では、溶出液の pH が 7.0 ～ 8.5 であることを確認します。
5. 溶出液が正しく滴下されていません。
推奨事項: 溶出効率を高めるために、溶離液をシリコン膜の中央に滴下し、室温で 5 分間放置します。
6. 溶出液の蓄積が少なすぎます。
推奨事項: ゲノム DNA 溶出には、説明書の要求に従って、少なくとも 15 μl の溶離液を使用してください。
分離されたゲノム DNA の純度が低い
ゲノム DNA の純度が低いと、酵素を切断できない、PCR で目的の遺伝子断片を取得できないなど、下流の実験で失敗や不満足な結果が生じる可能性があります。
考えられる原因は次のとおりです。
1. 異種タンパク質汚染、RNA 汚染。
分析: 精製カラムはバッファー PW を使用して洗浄されませんでした。Buffer PW 洗浄精製カラムが正しい遠心速度を使用して洗浄されていませんでした。
推奨事項: エタノールを添加する前に、上清に沈殿がないことを確認してください。必ず指示に従って精製カラムを洗浄してください。このステップは省略できません。
2. 不純物イオン汚染。
分析: バッファー WB 洗浄精製カラムが省略されているか、1 回のみ洗浄されたため、イオン汚染が残留しました。
推奨事項: 残留イオンをできるだけ除去するために、指示に従って Buffer WB を必ず 2 回洗浄してください。
3. RNA 酵素の汚染。
分析: 外来 RNase をバッファーに追加しました。バッファー PW 洗浄操作が正しくなかったため、RNase 残基が生じ、インビトロ転写などの下流の RNA 実験操作に影響を及ぼしました。
推奨事項: Foregene シリーズの核酸分離キットは、RNase を追加せずに RNA を除去できるため、口腔綿棒/FTA カード DNA 分離キットには RNase を追加する必要がありません。Buffer PW洗浄精製カラムの説明書に従ってください。この工程は省略できません。
4. エタノール残留物。
分析: バッファー WB は、精製カラムの洗浄後に空のチューブの遠心分離を実行しませんでした。
推奨事項: 指示に従って正しい空チューブ遠心操作を実行してください。
5. その他の不純物汚染。
分析: 保存されたサンプルまたは特別なサンプルは前処理されません。
推奨事項: 指示に従ってサンプルを徹底的に前処理してください。
