RNase はデリケートな言葉であり、RNA 抽出実験を頻繁に行う多くの学生にとっては聞きたくない言葉です。完全に武装し、最終的に非常に有毒な試薬であるフェノールとクロロホルムで抽出されたRNAは分解されました。和解してないよ！！！今日は、有名な RNase の起源を見てみましょう。
リボヌクレアーゼ (RNase) または RNase は、RNA を小分子に加水分解できるヌクレアーゼです。RNase は小分子タンパク質として非常に安定しています 。従来の高温高圧蒸気滅菌やタンパク質阻害剤では完全に不活化することはできません。RNase の安定性は主に構造内のジスルフィド結合によって決まります。たとえば、一般的に使用されているウシ膵臓の RNase はアミノ酸が 124 個しかありませんが、ジスルフィド結合が 4 つ含まれています。硫黄結合とジスルフィド結合により、RNase に優れた熱安定性が与えられます。さらに、rnaseは分子量が比較的小さいため、多くの場合、すぐに元の立体構造を復元することができます。
非常に安定していることに加えて、RNase は研究室のいたるところに存在します 。RNase は生物学的防御機構です。細胞にとって、外因性 RNA はしばしば致命的です。外因性 DNA と比較して、外因性 RNA は多くの場合より危険です。RNA は転写および翻訳されるため、ほとんどすべての生物は外因性 RNA の侵入を防ぐために RNase を進化させてきました。そのため、研究室で培養された菌体やRNAを抽出するあなたからはRNaseの香りが漂います。人間の体液（唾液、涙など）にはRNaseが多く含まれているため、RNAが分解されても泣かないでください。泣けば泣くほどRNAの分解が進みます。！シスター・ダイユはRNA抽出には向いていない！
また、デリケートな皮膚にもRNaseが多く含まれており、皮膚が触れたマーカーやピペット、冷蔵庫のドアやドアハンドルにもRNaseが含まれています。
とりとめのない話が続いたので、RNase への対処方法を見てみましょう。
RNA を除去するときに誰もが最初に考えるのは、DEPC(ピロ炭酸ジエチル）。DEPC は主に、RNase 活性基ヒスチジンのイミダゾール環と結合することによってタンパク質を変性し、それによって酵素の活性を阻害します。0.1% DEPC は Rnase に対してより優れた除去効果をもたらしますが、DEPC は発がん性物質であることが知られているため、使用する際には特別な注意を払う必要があることに注意する必要があります。
RNase については、2 つの側面から始める必要があります。1 つ目は内因性 RNase の活性を阻害することです。
Trizol に含まれるグアニジン イソチオシアネートや DTT などの従来の RNA 抽出試薬は RNase のジスルフィド結合を開く可能性がありますが、特に組織サンプルには依然として RNase が存在するため、低温に注意してください。
1.組織サンプルを取り出したら、すぐに液体窒素または市販の RNA 保存液に浸してください。
2.細胞サンプルのRNAを抽出した後、溶解溶液に加え、アイスボックス上で溶解します。
3. 粉砕には液体窒素を使用するのが最善です 組織サンプルが均質化されるとき。液体窒素を使用しない電動ホモジナイザーを使用する場合は、ホモジネートアダプターを完全に予冷することに注意してください。
2 つ目は外因性 DNase
1.完全武装し、白衣を着用し、マスクを着用し、必ず新しい手袋を着用してください (倹約しないでください!! トリゾールは非常に腐食性が高く、手袋を通しても非常に強いので、手に滴らないようにしてください)。
2.使用するすべてのピペットチップ、EP チューブ、PCR チューブおよびその他の機器は、脱 RNase 処理する必要があります。0.1% DEPC に浸漬し、高圧で加圧することができます。ドラフト内での作業には注意してください。地元の暴君は酵素を除去するための消耗品を直接購入することができます。
PS: 怠惰な方法を教えてください。高温高圧ではRNaseを完全に除去することはできませんが、RNaseの大部分は除去されます。２回の高温高圧は効果があり、ＲＮＡの抽出にはほとんど効果がありません。
3.アルコールはタンパク質を変性させる可能性があるので、RNA 抽出テーブルは 75% アルコールで拭くことができます 、手袋にもアルコールをスプレーすることができます。
4.最終的な RNA 溶解溶液と遠心分離管も脱 RNase 処理する必要があります。DEPC 水は一般的に使用される RNA 溶解溶液です。DEPC水の正しい準備方法についてお話しましょう（市販のDEPCを購入した場合は、忘れずに再梱包してください）
超純水にDEPCを1:1000で加え、よく振り混ぜ、37℃で一晩放置し、121℃、15分間高温高圧滅菌します。DEPC 水は 1 ml ずつに分けて -20°C で保存できます。
最後にまとめると、低温が鍵であり、消耗品は適切に扱われ、完全武装し、会話は少なくなります。
さて、今日の戦略はここまでです。あなたが言及したすべてのRNAの濃度と純度を祈ります。A260/A280はどちらも2.0です！！！
もちろん、を使用する場合は、室温操作 RNA 抽出キット、上記のようなトラブルが発生しない可能性があります。
DNaseを添加せず、室温での操作により細胞からtotal RNAを11分で抽出し、動物組織や植物からtotal RNAを30分で抽出します。
トライアルサンプルについては、下記までお問い合わせください。overseas@foregene.com
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投稿日時: 2022 年 8 月 25 日
