接着剤の回復性を向上させるためのヒント

1. 電気泳動中のサンプル負荷を増やします。

2. 新たに調製した電気泳動バッファーを使用します。

3. 接着剤を切断するときは、接着剤の切断量を減らすためにストリップで接着剤のみを切断するようにしてください。目的の破片が少ない接着剤は必要ありません。そうしないと、回復率に影響します。

4. 2 つ以上の接着剤を溶かした後、体積の大小に関わらずチューブを使用し、同じカラムに移します。

5. ゾルに添加される溶液は、DNA の膜への結合を促進するため、もう少し多くても構いませんが、一般に 750 μl を超えないようにしてください。

6. ゲル回収の鍵は、カラム内の溶液の塩濃度、酸性度 (電荷)、および疎水性によって DNA をカラムに結合させることです。したがって、電気泳動バッファーの pH が高すぎる場合は、10ul (pH 5.0、3mol/L NaAC) をゾルに追加できます。膜上の DNA 分子をよりよく遮断するために、接着剤を溶解した後、液体に 30% イソプロパノールを加えて加熱します。

7. 溶離液を加える前に、カラムを室温で数分間 (約 10 分間) 放置し、エタノールを完全に蒸発させます。

8. 最後に、回収量を最小限に抑えるために、溶離液の追加量を減らします。一般に、溶出には 30 ～ 50 μl の溶離液が使用されます (少なすぎないように注意してください。少なすぎると膜を濡らすことができず、溶出が促進されません)。溶出液滴はメンブレンの中心にあり、メンブレンに結合した DNA を完全に溶出します。

9. 溶離液を加えた後、55 度の水浴で 5 分間溶出するか、50 度の水浴で 10 分以上放置するか、4 度で一晩パラフィルムで密封し、翌日遠心分離して回収すると効果は良好です。

10.遠心分離した溶出液を吸着カラムに戻し、再度遠心分離します。

PCR産物回収の詳細な方法と手順

1.普通ゴムのリサイクル

接着剤を回収したい場合は、回収率が少し高くて便利なキットを利用するのがおすすめです。どうしても手動で回復する必要がある場合は、接着剤を切断した後に 3 倍の量の TE を追加できます。水浴中で溶解した後、フェノール、フェノール/クロロホルムがきれいに抽出され、エタノールが沈殿します。それでおしまい。

2. 低融点ゲルからの DNA 回収

DNA 断片の精製 ゲルと同量の TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0、0.1 mmol/l EDTA) を加え、65℃の水浴に 5 分間入れてゲルを完全に溶解します。

室温に戻した後、等量のフェノール（TEで飽和、上層にTEを封入し、下層のフェノールを除去したもの）を加えて穏やかに混合（混合は不要）し、12,000 rpmで3分間遠心分離した。1～2回繰り返します。

上清をとり、0.1倍量の3mol/L酢酸ナトリウム（pH5.2）と2.5倍量の無水エタノールを加えてエタノール沈殿を行う。精製したDNAを適量のTEで溶解し、含有量を測定し、使用準備をします（標的遺伝子の構造解析やプローブの調製などに使用できます）。

3. 優れた増幅特異性による PCR 回収

PCR 増幅の特異性が良好であれば、PCR 産物を単純に精製して回収するだけで済みます。50μg/mlのプロテ​​イナーゼKをPCR産物に加え、37度で1時間、フェノール/クロロホルムで1回抽出し、クロロホルムで1回抽出し、0.1容量の上清を加えます。酢酸ナトリウムは、２．５倍量の無水エタノールを用いて沈殿させることにより回収した。

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