臨床検査はサンプルの収集から始まりますが、サンプルの収集は最も見落とされやすいものです。サンプル収集で最も重要なことは、正しいサンプルの種類を選択し、適切なサンプリングツールを使用し、合理的な輸送と処理を実行することです。

I. サンプルの種類

一般的なサンプルの種類は次のとおりです。

サンプリング方法は、農産物取引（バザール）市場における新型コロナウイルスの環境モニタリングの技術仕様を参照できます。」

1. 喉の綿棒、手、衣服、および医師のその他の物体からサンプルを採取します。ウイルス サンプリング チューブ内のウイルス保存液を使用し、サンプリング綿棒に完全に浸透させる必要があります。地面の表面）に塗布、洗浄を3回以上繰り返します。同時に、サンプリング対象物の表面に対して多点分散サンプリングを行う必要があります。

2. 食品表面の綿棒サンプル: 食品サンプルを直接採取することはできません。採取する食品は慎重に分離し、綿棒サンプルを採取する前に清潔なサンプリングバッグに保管する必要があります。ウイルス採取管内のウイルス保存液を採取綿棒に十分に浸した後、採取する食品サンプルの表面の塗布と洗浄を3回以上繰り返す必要があります。同時に試料表面の多点分散サンプリングを行う必要があります。

3. 下水サンプル：市場の排水システムの分布に応じて、内部のパイプネットワークの収集、水の流れ方向の下流、または自治体のパイプネットワークとの接続に焦点を当てて、2〜3か所の下水サンプリング場所を選択します。綿棒サンプルの採取は、採取綿棒で下水中に浸漬して下水を吸着させ、採取管内で3回以上洗浄します。下水サンプルを収集するには、ポリエチレンのプラスチックボトルを使用して 30 ～ 500 mL の下水サンプルを収集します。500 mL を超える下水収集の場合は、ポリエチレン製プラスチックバケツまたは現場の水サンプルの特別な濃縮装置を使用できます。同時に下水採取場所については多点分散採取を行う必要がある。

4. 動物サンプル：生きた動物の場合、サンプリング綿棒を使用して体表綿棒、口腔咽頭綿棒および肛門綿棒を収集することができ、排泄物または分泌物サンプルも収集し、記録シートに適宜記録することができます。皮剥ぎ等を行った動物サンプルの場合は、綿棒を使用して体表および体腔綿棒サンプルを採取します。ウイルス採取管内のウイルス保存液を採取綿棒に十分浸透させ、採取する食品サンプルの表面に塗布を繰り返す必要があります。シャブ3回以上。同時に試料表面の多点分散サンプリングを行う必要があります。

5. その他の器具: ケージや水槽などの動物の輸送および飼育用のコンテナ。まず、容器内で保管・飼育されている動物の種類を観察または把握し、容器内壁の綿棒サンプルや内容物の液体サンプルを採取します。

6.エアロゾルサンプルは、人が集まる場所、換気の悪い地域の商圏、事務所、トイレなどで採取してください。

II.サンプリングツール
1.採血管
後で核酸検査と抗凝固剤のサンプルを行う必要がある場合は、EDTA 抗凝固剤を含む真空血管を使用して血液を採取することをお勧めします。血清サンプルの場合は、抗凝固剤を含まない真空血管を使用することをお勧めします。

2. サンプリング綿棒

特定のウイルスを不活化し、PCR 検査を阻害する物質が含まれている可能性があるため、アルギン酸カルシウム綿棒や木の棒付き綿棒の代わりにポリプロピレン綿棒を使用することをお勧めします。綿繊維はタンパク質の吸着力が強く、その後の保存液に溶出しにくいため、綿棒の付いた綿棒は使用できません。

「新型コロナウイルス核酸の10-in-1混合採取・検出の技術仕様書」では、「採取綿棒はポリエステル、ナイロン等の非綿、非アルギン酸塩素材で作られ、ハンドルは非木材で作られている必要がある」と明記されている。破断点はスワブの先端から約3cmのところにあり、壊れやすいです。」

米国の CDC も「プラスチックまたはワイヤーのシャフトが付いた合成繊維の綿棒のみを使用してください。」と述べています。アルギン酸カルシウム綿棒や木製軸の綿棒は使用しないでください。一部のウイルスを不活化し、PCR検査を阻害する物質が含まれている可能性があるためです。

現在広く使用されているのは、プラスチック棒と組み合わせた使い捨ての滅菌ナイロン植毛綿棒です。植毛綿棒は吸水性と放湿性が優れています。サンプリング場所の違いに応じて、スワブヘッドのサイズや繊維も異なります。厚さ。」

3. サンプル輸送保存液

ウイルス不活化保存液: 適切な量のグアニジン塩濃度とさまざまなウイルス溶解成分により、ウイルスを直接溶解して核酸を放出し、RNase および DNase を不活化して、その後の qPCR 検出に使用できる核酸の完全性を確保できます。ウイルスの培養や分離には使用できません。

ウイルス輸送および保存液: ウイルスの生存に必要な塩、アミノ酸、ビタミン、ブドウ糖、タンパク質が含まれており、ウイルスの活性を維持できます。将来的にはウイルスの核酸抽出や検出に利用できるほか、ウイルスの培養や分離にも利用できる。

4. サンプル保存管とサンプルバッグ

サンプル保存チューブは、核酸を吸着しないネジキャップ付きの滅菌プラスチックチューブである必要があります。サンプルの漏れや汚染を防ぐために、各サンプル チューブをサンプル バッグで覆う必要があります。

Ⅲ。サンプル中の妨害物質

PCR実験における妨害物質

1. 内因性干渉物質

身体サンプル中に存在する物質は、他の物質の検出を妨げる可能性があります。

血：ヘム（>1mg/ml）、ヘミン（>0.1ng/μl）、トリグリセリド、IgGなど。

尿：尿素 (20mM);

スツール：植物多糖類、コール酸塩。

組織：プロテアーゼ、コラーゲン。

牛乳：プロテアーゼ、カルシウムイオン；

薬物：抗生物質、抗ウイルス薬、ホルモンなど。

他の。

2. 外因性干渉物質

これは、in vitro で他の物質の検出を妨げる可能性のある物質に由来します。サンプルの収集および処理中に接触する可能性のあるサンプルの添加物および物質:

テスト用品: 血清分離ゲル、サンプル採取容器とゴム栓、カテーテル、カテーテル洗浄液、手袋パウダーなど。

抗凝固剤: ヘパリン (>0.1 U/mL)、EDTA (>0.5 mM) など。

有機溶剤: イソプロパノール (>0.1 IU/ml)、ベタイン、ジメチルスルホキシド、ホルムアミド、グリセリン、PEG など。

消毒剤: アルコール (エタノール > 1%)、アルデヒド、フェノール (フェノール > 0.2%)、過酸化物、強酸 (HCL)、強アルカリ (NaOH) など。

洗剤：SDS (>0.005%);

土壌: 腐植

染料：インディゴ

他の。

環境サンプルの採取など、実際の屋外サンプリング環境では、サンプル中にさまざまな妨害物質が含まれる可能性があり、場所ごとに妨害物質の組成が異なるため、現地の状況に応じたPCR干渉実験を行う必要があります。

IV.サンプルの保管および輸送条件

新たに採取した臨床検体は、採取後 2 ～ 4 時間以内に 2°C ～ 8°C で検査室に送る必要があります。4℃で24時間以内に保管してください。ウイルスの分離や核酸の検出に使用した検体は、できるだけ早く検査する必要があります。24 時間以内に検査できる検体は 4°C で保存できます。24 時間以内に検出できない検体は、-70°C 以下で保管する必要があります (そうでない場合は、-20°C の冷蔵庫で 70°C で保管してください)。

まとめ：サンプルの標準化された収集、輸送、保管は、その後の検査に不可欠です。多くの臨床検査の偽陰性は、ウイルス核酸の分解につながるサンプルの不適切な収集、輸送、保管によって引き起こされます。しかし、多くの研究室は依然としてサンプリングの重要性を無視しています。この記事がサンプリングに対するみんなの注意を呼び起こし、より科学的で合理的なサンプリングが行われることを願っています。

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