どのくらい知っていますか

Nについて核酸抽出

精製核酸の始まりと終わり

何事も最初は難しい、精製された核酸が一番

分子実験の開始、その後の実験に向けて

成功か失敗かは決定的な影響を及ぼします。

微量/超微量 UV 分光光度計は、核酸濃度、タンパク質および塩イオン残留物を簡単、迅速、経済的に検出できるため、多くの科学研究者に好まれています。

ご存知のとおり、A260は核酸の吸光度OD値、A280はタンパク質濃度の吸光度OD値、A230は塩イオン濃度の吸光度OD値を意味するため、A260は核酸濃度、A260/280はタンパク質残基、A260/230は塩イオン残基を意味しますが、これは研究者が多数の測定結果に基づいて発見した法則にすぎず、「従来型」 DNA と RNA の純度を説明できると信じるにはある程度。これは核酸の収量と純度を特定するための唯一の基準ではなく、参照としてのみ使用され、「ゴールドスタンダード」ではありません。

Thermo Fisher ND-2000 のマニュアルでは、テスト結果の信頼性が強調されています。

その理由は、マイクロ/ウルトラマイクロ UV 分光光度計を使用して得られた結果は、核酸の収量と純度を側面から反映しているだけであり、多くの影響因子 (光路、サンプル量、サンプル濃度、pH 値、吸光度測定に影響を与えるその他のイオンなど) が存在するため、測定された OD 値は必ずしも正確ではないためです。同時に、吸光度値測定材料の特異性の欠如により、一本鎖 DNA、二本鎖 DNA、RNA、dNTP、および一部のタンパク質はすべて 260nm の波長に吸収ピークを持ち、A260 単独で測定された濃度が必ずしも本物の DNA または RNA であるとは限りません。濃度、その完全性と劣化は判断できません。

では、精製された核酸の品質はどのように判断すればよいのでしょうか?検出にはマイクロ/ウルトラマイクロ UV 分光光度計を使用するだけでなく、核酸の純度や完全性を視覚的に表示し、ある程度の濃度を表示するにはアガロースゲル電気泳動などの方法も必要です。このように、さまざまな方法の検出結果から得られる核酸の収量と純度は信頼できるものになります。

実験チャートの比較

H1299 細胞のゲノム DNA を A 社の DNA 抽出キットを使用して抽出したところ、重大な不純物の混入が見られ、高い OD 値が発生しました。

（OD測定値とそれに対応するエレクトロフェログラム）

評価指標

核酸の収量と品質テストの「ゴールドスタンダード」はありますか?

私たちが知る限り、簡単で早くて安価な方法はありません。分光光度計、ゲル電気泳動、質量分析など、いずれも溶液中の核酸の濃度や純度をさまざまな側面から反映するため、相互に参照して判断する必要があります。

最高の評価指標は常にフォローアップの実験的アプリケーション。逆転写や PCR 増幅の効率には影響しません。信頼性の高い増幅産物と Ct 値が得られ、シーケンシングによって完全な配列が得られれば、核酸抽出は成功します。

要約すると、比率のみの理論の見解は、「下流の優れた実験結果を優れた抽出パラメータとして使用する」という見解によって異議を唱えられるべきです。

高い DNA/RNA 純度を得るために推奨される Foregene DNA RNA 抽出キット:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/