鉛

長い非コード RNA である lncRNA は、200 ヌクレオチドを超える長さ (通常は 200 ～ 100000 nt) の非コード RNA です。lncRNA は、エピジェネティック、転写および転写後のレベルで遺伝子発現を制御し、X 染色体サイレンシング、ゲノムインプリンティングおよびクロマチン修飾、転写活性化、転写干渉、核輸送、細胞周期制御、細胞分化制御、および線量補償効果 (線量補償効果) およびその他の多くの重要な制御プロセスに関与し、ヒトの病気の発生、発症、予防と密接に関連しており、現在生物医学の分野でホットスポットの 1 つとなっています。

01  LncRNAの種類と特徴

上の図に示すように、lncRNA はその形成源の違いに応じて多くの種類に分類されます。次のような特徴があります。

1. lncRNA は通常より長く、分化中に動的発現と異なるスプライシング方法を伴います。
2. 通常、lncRNA はコード遺伝子と比較して発現レベルが低い
3. ほとんどの lncRNA は、組織の分化と発生の過程において明らかな時間的および空間的発現特異性を持っています。
4. 腫瘍やその他の疾患には特徴的な発現がある
5. lncRNAの細胞内位置は多様である
6. 配列の保存性は低いが、関数にはある程度の保存性がある、など。

02 LncRNA逆転写に関するよくある質問

細胞内の lncRNA の含有量が少なく、長さが長く、構造が高度であるため、このような RNA はステム ループやヘアピンなどの複雑な構造を持つことが多く、RT-qPCR では逆転写の失敗や効率の低下といった問題が発生しやすくなります。

03 LncRNA逆転写溶液

中心的な規則では、RNA ウイルスが独自の逆転写酵素を使用して、RNA を鋳型として DNA を合成するプロセスを逆転写と呼びます。RNA ウイルス逆転写酵素を使用して in vitro で cDNA テンプレートを合成するプロセスは、逆転写と呼ばれます。逆転写システムに含まれる主な要素: RNA テンプレート、逆転写酵素、プライマー、その他のコンポーネント。

1.RNAテンプレート

逆転写に対する RNA テンプレートの影響は、その構造、純度、完全性に反映されます。抽出された RNA の純度と完全性が高ければ高いほど、逆転写の効率も高くなり、その後の定量的結果の精度も高まります。一般的に使用される RNA 抽出試薬によって精製された RNA には、ほとんどの逆転写酵素に対して強力な阻害効果を持つアルコールおよびグアニジン塩の残基が含まれることがよくあります。

2.逆転写酵素

逆転写酵素は、逆転写システム全体に重要な影響を与えます。ほとんどの研究室で使用される逆転写酵素の適切な温度は、通常 42°C です。実際、高レベルの RNA 構造を開くにはより高い温度が必要であり、逆転写酵素の要件もより高くなります。

3.プライマー

逆転写プライマーには、遺伝子特異的プライマー、ランダムプライマー、およびオリゴ dT プライマーが含まれます。ほとんどの lncRNA にはポリ A テールが含まれていないため、ランダム プライマーと Oligo dT を適切に一致させることが重要です。

4.その他のコンポーネント

RNAは特に分解されやすいため、逆転写系への成分の導入を最小限に抑えることができ、RNaseの侵入を効果的に防ぎ、逆転写をスムーズに進行させることができます。

FオレジーンRNAテンプレートから取得し、qPCRへの逆転写

lncRNA 検出を包括的にサポートします

動物トータルRNA I慰めキット（gDNA除去カラム付き）

細胞トータルRNA I慰めキット（gDNA除去カラム付き）

Lnc-RT HeroTM I(gDNaseあり)(lncRNAからのファーストストランドcDNA合成用スーパープレミックス)

リアルタイム PCR EasyTM-SYBR グリーン I

A利点 ofRNA抽出:

このキットは第 3 世代の RNA 抽出技術を使用しており、DNase を使用する必要はありません。

96、24、12、および 6 ウェルプレート培養細胞から 11 分で、gDNA フリーの高純度、高品質の全細胞 RNA を高効率で抽出します。

lncRNA逆転写の利点:

LncRNA 用に特別に開発された逆転写システムで、ゲノム DNA コンタミネーションを迅速に除去します。

逆転写システムは熱安定性が高く、50℃でも良好な逆転写性能を維持します。

GC 含有量が高く、複雑な二次構造を持つテンプレートを高効率で反転できます。

利点of qPCR:

ホットスタート Foregene Taq ポリメラーゼは、より高い増幅効率、より高い増幅感度、より高い増幅特異性を備えています。

最適化された Real PCR Easy Mix により、SYBR Green I は検出感度が高く、蛍光強度が類似製品の 3 ～ 5 倍であるため、さまざまな種類の蛍光定量実験のニーズを満たすことができます。