SOPシステムの構築

PCR実験SOPを定め、実験者の行動を標準化する。

実験者は作業手順を厳守し、人為的要因によるPCR汚染を最小限に抑え、または作業中の汚染の発生を防止します。さらに、実験者は、関連機器の操作に習熟し、作業プロセス全体を明確にし、汚染の処理方法と実験室の品質管理方法を習得し、試験結果を正しく解釈できるなど、対応する専門的な知識とスキルを備えている必要があります。

建築基準 PCR 検査室

PCR検査室は原則として試薬調製エリア、検体処理エリア、増幅エリア、増幅産物解析エリアの4つのエリアに分かれています。最初の 2 つの領域は増幅前領域、最後の 2 つの領域は増幅後領域です。増幅前ゾーンと増幅後ゾーンは厳密に分離する必要があります。実験材料、試薬、記録紙、ペン、洗浄剤などは、増幅前エリアから増幅後エリア、つまり試薬調製エリア、サンプル処理エリア、増幅エリア、増幅産物分析エリアへのみ流れることができ、逆方向には流れてはなりません。実験室内の空気の流れも、逆方向ではなく、増幅前エリアから増幅後エリアに流れる必要があります。

実験手順を減らす

研究室が PCR の検出と同定のみを行う場合は、従来の PCR の代わりに蛍光定量 PCR を使用することをお勧めします。

蛍光定量的なPCR検出結果を蛍光シグナルにより収集・解析できるため、反応後の電気泳動のために蓋を開ける必要がなく、反応産物の漏洩によるエアロゾル化によるPCR産物の汚染を回避できます。ゲル電気泳動のローディングステップ中にキャップの開口部の数を増やすと、エアロゾル汚染が発生する可能性があります。定量的 PCR の適用を促進し、徐々に定性的 PCR を置き換えることをお勧めします。

UNG 汚染防止システムを採用

PCR 反応には UNG anti-PCR 製品コンタミネーション システムが使用されます。

システムは dTTP の代わりに dUTP を使用します。PCR 反応後、すべての PCR 産物 (DNA フラグメント) には dUTP が組み込まれます。次の PCR 反応では、システムに追加された UNG 酵素が PCR 前に 37°C で 5 分間インキュベートされます。これにより、dUTP を含むすべての DNA 断片が特異的に分解され、その後 PCR 反応が実行されます。これにより、PCR 産物によるエアロゾル汚染を完全に除去できます。効果は次の図に示されています。

※ダイレクトPCRシリーズは、FJバイオテック社製アンチPCR製品汚染システムのシリーズ製品をお選びいただけます。

提案

大規模なジェノタイピング検査を実施する検査機関の場合は、合理的な検査機関の建設に加えて、検査試薬に UNG 抗 PCR 製品汚染システムを使用することを強くお勧めします。

注意: このシステムを使用しても、すでに生じた PCR 産物のコンタミネーションを除去することはできません。したがって、PCR 産物の汚染を防ぐために、関連する検査の開始時には UNG システムを使用し、PCR 増幅には常に UNG システムを使用する必要があります。偽陽性。

次のような大規模検査を行う場合は、Forge Biotech の Direct PCR-UNG システムを使用することをお勧めします。 Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;

植物種子ダイレクト PCR キット-UNG；

動物組織ダイレクト PCR キット-UNG；

マウステールダイレクトPCRキット-UNG；

ゼブラフィッシュダイレクトPCRキット-UNG。

Foregene のこのシリーズのキットは、PCR 検出を迅速かつ大規模に実行できるだけでなく、PCR 製品の汚染を効果的に防止および制御することもできます。