PCR実験SOPを定め、実験者の行動を標準化する。
実験者は操作手順を厳守し、人為的要因によるPCR汚染を最小限に抑え、または汚染の発生を防止します。さらに、実験者は、関連機器の操作に習熟し、作業プロセス全体を明確にし、汚染の処理方法と実験室の品質管理方法を習得し、試験結果を正しく解釈できるなど、対応する専門的な知識とスキルを備えている必要があります。
標準的な PCR 検査室を設立します。
PCR検査室は原則として試薬調製エリア、検体処理エリア、増幅エリア、増幅産物分析エリアの4つのエリアに分かれています。最初の 2 つの領域は増幅前領域、最後の 2 つの領域は増幅後領域です。増幅前ゾーンと増幅後ゾーンは厳密に分離する必要があります。実験材料、試薬、記録紙、ペン、洗浄剤等は、増幅前エリアから増幅後エリア、すなわち試薬調製エリア→サンプル処理エリア→増幅エリア→増幅産物分析エリアの順にのみ流れることができ、逆流してはなりません。実験室内の空気の流れも、増幅前領域から増幅後領域に流れる必要があり、逆流してはなりません。理想的な PCR 検査室の設計を以下に示します。
図 A: バッファールームが陰圧になっている理想的な PCR 検査室セットアップ モード
図 B: バッファー ルームが陽圧の場合の理想的な PCR 検査室セットアップ モード
図 A と図 B に示されている PCR 検査室のセットアップ図は、より理想的なセットアップ モードである必要があり、条件を備えた検査室はこのモードを設計に参照できます。一般的な研究室の場合は、PCR増幅エリアと生成物解析エリアを分離できるようにし、サンプル調製エリアとPCR増幅エリアのカバーの開口部をできるだけ少なくすることをお勧めします。留意してください: 製品分析エリアにある製品および実験用品をサンプル調製エリアおよび PCR 増幅エリアに持ち込むことは固く禁止されています。
研究室が PCR の検出と同定のみを行う場合は、従来の PCR の代わりに蛍光定量 PCR を使用することをお勧めします。
蛍光定量的PCR検出結果を蛍光シグナルにより収集・解析できるため、反応後の電気泳動のために蓋を開ける必要がなく、反応産物の漏洩によるエアロゾル化によるPCR産物の汚染を回避できます。ゲル電気泳動のローディングステップ中にキャップの開口部の数を増やすと、エアロゾル汚染が発生する可能性があります。定量的 PCR の適用を促進し、徐々に定性的 PCR を置き換えることをお勧めします。
PCR 反応には UNG anti-PCR 製品コンタミネーション システムが使用されます。
システムは dTTP の代わりに dUTP を使用します。PCR 反応後、すべての PCR 産物 (DNA フラグメント) には dUTP が組み込まれます。次の PCR 反応では、システムに追加された UNG 酵素が PCR 前に 37°C で 5 分間インキュベートされ、dUTP を含むすべての DNA 断片を特異的に分解してから PCR 反応を実行します。これにより、PCR 産物によるエアロゾル汚染を完全に除去できます。効果は次の図に示されています。
注: ダイレクト PCR シリーズの場合、Foregene 社の抗 PCR 製品コンタミネーション システムのシリーズ製品を選択できます。提案
大規模なジェノタイピング検査を実施する検査機関の場合は、合理的な検査機関の建設に加えて、検査試薬に UNG 抗 PCR 製品汚染システムを使用することを強くお勧めします。
注意: このシステムを使用しても、すでに生じた PCR 産物のコンタミネーションを除去することはできません。したがって、PCR 産物の偽陽性の混入を防ぐために、関連する検査の開始時に UNG システムを使用し、PCR 増幅には UNG システムを使用する必要があります。
次のような大規模検査を実施する場合は、Foregene の Direct PCR-UNG システムを使用することをお勧めします。
植物葉ダイレクト PCR キット-UNG；
植物種子ダイレクト PCR キット-UNG；
動物組織ダイレクト PCR キット-UNG；
マウステールダイレクトPCRキット-UNG；
ゼブラフィッシュダイレクトPCRキット-UNG。
Foregene のこのシリーズのキットPCR 検出を迅速かつ大規模に実行できるだけでなく、PCR 製品の汚染を効果的に防止および制御することもできます。
投稿時間: 2021 年 3 月 19 日
