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1:実験用品は適時に交換してください

ニュース812 (1) 

(NTC) ネガティブコントロールを設定し、それを何度も繰り返します。研究室に PCR 製品の汚染があることが判明したら、すべての実験用品を適時に交換してください。プライマーを再希釈して調製する、ピペットチップ、EP チューブ、ddH2O などを再滅菌する、新しいピペットに交換する、一時的に他の研究室を借りて PCR 実験を行うなど。汚染された実験室は、PCR 産物の汚染がなくなるまで換気し、紫外線を照射してから実験を続行するものとします。

2:UV照射時間を延長する

ニュース812 (2)

DNA汚染を除去するには、通常の紫外線照射を通常より2時間延長する必要があることに注意してください。それでも、DNA 汚染の小さな断片 (200 bp 以下) を除去する UV 照射の効果はまだ良好ではありません。

紫外線の波長(nm)は254/300nmが一般的で、30分間照射すれば十分です。残留 PCR 産物の汚染を排除するために UV を選択する場合、PCR 産物の長さと産物配列内の塩基の分布を考慮する必要があることに注意してください。UV 照射は 500 bp を超える長いフラグメントに対してのみ効果があり、短いフラグメントにはほとんど影響がありません。

UV 照射中、PCR 産物内のピリミジン塩基は二量体を形成します。これらの二量体は伸長を停止させることができますが、DNA 鎖内のすべてのピリミジンが二量体を形成できるわけではなく、UV 照射によって二量体が切断されることもあります。。二量体形成の程度は、UV 波長、ピリミジン二量体の種類、および二量体部位に隣接するヌクレオチドの配列によって異なります。したがって、PCR 増幅フラグメントが小さい場合は、UNG 抗 PCR 製品コンタミネーション システムを使用することをお勧めします。

3:一般的に使用されるDNA汚染除去剤

ニュース812 (3)

ピペットを追加するとエアロゾルが発生しやすくなりますが、これを避けるのは難しく、すぐに沈降します。したがって、DNA 汚染の拡大を防ぐために、特別な DNA 汚染除去剤を頻繁に使用することが良い選択であることは間違いありません。

4:UNG汚染防止システムを使用する

ニュース812 (4)

PCR 製品の汚染が除去された後、検査機関は UNG 抗 PCR 製品汚染システムを使用して PCR 製品の汚染を防ぐことができます。一般的な実験室では、PCR 産物のコンタミネーションの発生を防ぐために、簡単な実験区画を実行し、PCR 産物エリアを他のエリアから厳密に分離し、実験室の特定のルールや規制を確立し、関連するトレーニングを実施することができます。

推奨事項: 合理的な PCR 実験室を設立し、良好な PCR 環境を維持し、標準的な PCR 操作手順を策定し、実験者の厳格な操作意識を養うことが、PCR 実験の汚染を防止または軽減する鍵となります。


投稿時間: 2021 年 8 月 12 日