PCR 反応を行う際には、誰しも必ずあんな問題やこんな問題に遭遇すると思いますが、そのほとんどは大きく 2 つの問題に分類できます。

遺伝子テンプレートの増幅 (増幅) が少なすぎます。
非標的遺伝子の増幅が多すぎる。
添加剤の使用は、これらの問題を解決するための一般的な戦略の 1 つです。通常、添加剤の役割には 2 つの側面があります。
二次構造遺伝子の（二次構造）。
非特異的なプライミングを減らします。
今日は、編集者が PCR 反応における一般的な添加剤とその機能を簡単に紹介します。
二次構造を減少させる添加剤
スルホキシド(DMSO)
遺伝子サンプルGC含有量が高い。ただし、DMSO は Taq ポリメラーゼ活性も大幅に低下させます。したがって、誰もがテンプレートのアクセシビリティとポリメラーゼの活性のバランスを取る必要があります。編集者は、実験に適した濃度を見つけるために、2% から 10% などのさまざまな濃度の DSMO を試してみるとよいと提案しています。
非イオン性洗剤
0.1 ～ 1% Triton X-100、Tween 20、NP-40 などの非イオン性界面活性剤は、通常、DNA の二次構造を減少させます。これにより、鋳型遺伝子の増幅を高めることができますが、非特異的な増幅が発生するという問題も発生します。したがって、これらの添加剤は、破片のない低収量の PCR 反応にはうまく機能しますが、比較的不純な PRC 反応にはあまりうまく機能しません。非イオン性洗剤のもう 1 つの利点は、SDS 汚染の軽減です。通常、DNA 抽出プロセス中に SDS が PCR ステップに導入され、ポリメラーゼの活性が大幅に阻害されます。したがって、反応に 0.5% Tween-20 または Tween-40 を添加すると、SDS の悪影響を中和できます。
ベタイン_
ベタインは二次構造形成を減少させることで DNA 増幅を向上させることができますが、一般に市販の PCR キットには「謎」の追加物です。ベタインを使用したい場合は、塩酸ベタイン (ベタイン HCl) ではなく、ベタインまたはベタイン一水和物 (ベタインまたはベタイン一水和物) を入れて、最終濃度 1 ～ 1.7 M に調整する必要があります。ベタインは、DNA 融解/DNA 変性の塩基対組成依存性を排除するため、特異性の向上にも役立ちます。
非特異的なプライミングを減らすための添加剤
ホルムアミド
ホルムアミドは、一般的に使用される有機 PCR 添加剤です。DNA の主溝および副溝と結合することができ、それによってマスター DNA 二重らせんの安定性が低下し、DNA の融解温度が低下します。PCR 実験で使用されるホルムアミドの濃度は通常 1% ～ 5% です。
テトラメチル塩化アンモニウム( TMAC）
塩化テトラメチルアンモニウムは、ハイブリダイゼーションの特異性 (ハイブリダイゼーション特異性) を高め、DNA の融解温度を上昇させることができます。したがって、TMAC は非特異的プライミングを除去し、DNA と RNA の誤った結合を減らすことができます。使用する場合縮重プライマーPCR 反応では、TMAC を忘れずに添加してください。TMAC は通常 15 ～ 100 mM の濃度で使用されます。
その他の一般的な添加剤
上記の 2 つのカテゴリの添加剤に加えて、PCR 反応には多くの一般的な添加剤があり、それらは異なる機能を持っていますが、それらも非常に重要です。
マグネシウムイオン
マグネシウムイオンはポリメラーゼにとって不可欠な補因子（補因子）であり、マグネシウムイオンがなければポリメラーゼは不活性になります。ただし、マグネシウムイオンが多すぎると、ポリメラーゼの効率に影響を与える可能性があります。各 PCR 反応におけるマグネシウムイオンの濃度は異なります。キレート剤 (EDTA やクエン酸塩など)、dNTP およびタンパク質の濃度はすべて、マグネシウム イオンの濃度に影響します。したがって、PCR 実験で問題が発生した場合は、マグネシウム イオン濃度を 0.5 ～ 1 mM の間隔で、たとえば 1.0 ～ 4.0 mM まで変更してみることができます。
凍結融解サイクルを複数回繰り返すと、塩化マグネシウム溶液の濃度層別化が生じる可能性があることに注意してください。したがって、使用する前に完全に溶解し、よく混ぜてから使用する必要があります。
ウシ血清アルブミン(ウシアルブミン、BSA)
分子化学実験において、特に制限酵素消化や PCR 実験において、ウシ血清アルブミンは非常に一般的な添加剤です。PCR 反応では、BSA はフェノール化合物などの汚染物質を減らすのに役立ちます。また、試験管の壁への反応物の付着を軽減できるとも言われています。PCR 反応では、通常、添加される BSA の濃度は 0.8 mg/ml に達することがあります。
 
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