序章:
RNA、学名リボ核酸、その略語はRiboNucleic Acidに由来し、少なくとも数十個のリボヌクレオチドがリン酸ジエステル結合を介して結合して形成される核酸の一種です。
RNA 探索の前提は汚染のない Total RNA を抽出することであり、RNA 抽出の基本原理は大まかに次のように要約できます。
1. 最初に細胞を破壊する
2. 次に、高分子不純物(タンパク質、脂質、DNA など)を除去します。
3. 最後に、塩と有機溶媒を除去しながら RNA を沈殿させ、さらに RNA を精製します。
抽出法の昔と今
第一世代の RNA 抽出方法は、ピョートル・チョムチンスキーという祖父とニコレッタ・サッキという祖母によって発明された TRIzol 沈殿法 (使用される試薬にはイソチオシアン酸グアニジン、フェノール、クロロホルムなどが含まれます) です。この発明により RNA 抽出が迅速かつ簡単に可能になり、それ以来 RNA 研究の隆盛が始まりました。
その後、おじいちゃんはこの特許をインビトロジェンに売却し、インビトロジェンはこの手法を世界に宣伝し、広く使われる手法となりました。
その後、Invitrogen は Thermo に買収されました。
代表的な製品:Invitrogen社のTRIzol試薬
しかし、TRIzol 沈殿法では RNA の沈殿と抽出を複数回行う必要があり、使用される試薬は毒性があり、操作に時間がかかります。
そこで、特異的な核酸吸着材としてシリカゲル膜を使用し、他の不純物を除去しながらサンプル中のRNAの回収率を最大限に高める第2世代のカラム酵素精製法が誕生しました。
第 2 世代の手法は、安定した性能に基づいて操作を簡素化し、リスク要因を軽減し、RNA 抽出の効率を向上させます。
代表的な製品:QIAGEN RNeasyおよびほとんどの国産製品
ただし、第 1 世代と第 2 世代の両方の方法では、DNA 汚染を除去するために DNase を使用する必要があり、その後の下流の実験に多少の不便をもたらします。残留 DNase は逆転写の効率を低下させ、第一鎖 cDNA 合成を低下させるため、結果の精度に影響を与えます。
したがって、第3世代の抽出方法は、第2世代をベースにして最適化される。実験には酵素を加える必要がなく、2 本のカラムだけで簡単に RNA を得ることができます。
カラム 1: DNA を除去する DNA クリーニング カラム
カラム 2: RNA 専用カラム RNA を特異的に吸着・回収します
このような簡単な操作は時間を節約するだけでなく、後続の実験の運営を容易にします。
代表的な製品:QIAGEN RNeasy Plus、フォアジーンRNA精製シリーズ製品
(RNeasyプラス)
(フォアジーンの植物トータルRNA分離キット)
静かに教えてください!Foregene の RNA キットには、人体に有毒物質を追加することなく、固体表面上の 400μg の RNase を 1 分間で完全に除去できる、非常に使いやすい RNase Eraser も提供されています。
写真1: 業務プロセス比較表
Foregene の製品は、わずか 2 曲で RNA 抽出を完了できます。実験の進捗状況を他の人に嫉妬させないでください。
写真2:E実験結果 比較表
初代(1:TRIzol)
第二世代(2:QIAGENのRNeasy)
第3世代(3:QIAGEN社のRNeasy plus、4:Foregene)
写真3:qPCRグラフ(増幅曲線グラフ)
第一世代(緑はTRIzol -、赤はTRIzol +)
第2世代(水色はQIAGEN RNeasy-、赤色はQIAGEN RNeasy+を意味します)
第 3 世代 (青は QIAGEN RNeasy plus、緑は Foregene を意味します)
(注: qPCR グラフの「-」は、DNase が添加されておらず、DNA 汚染が除去されていないことを示します。そのため、CT が高く、結果は正確ではありません。「+」は、DNase が添加され、DNA 汚染が除去されていることを示し、結果は正確です)
技術的なアップグレードはすべて、実験の操作がよりシンプルでユーザーフレンドリーな方向に発展していることを意味します。
Foregene は、より多くの科学研究者が実験時間とコストを節約し、高品質の実験結果を得て、より価値のある科学研究成果を共同で生み出すことを支援することを目指しています。
投稿時間: 2021 年 7 月 9 日